Fórmula de cálculo de nitritos en cine y televisión
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GB/T 5009.33—1996
Norma Nacional de la República Popular China Determinación de nitrito y nitrato en alimentos Determinación de nitrito y nitrato en alimentos GB/T 5009.33-1996 1 Asunto Contenido y ámbito de aplicación Esta norma especifica el método de determinación de nitrito y nitrato en los alimentos. Esta norma se aplica a la determinación de nitrito y nitrato en los alimentos. El límite de detección del método del nitrito es de 1 mg/kg y el límite de detección del método del nitrato es de 1,4 mg/kg. Artículo 1 Método colorimétrico del reactivo de Grice (Primer método) (Primer método) Principio de determinación del nitrito 2 Después de la precipitación y deslipidación de las proteínas, el nitrito se diazota con ácido p-aminobencenosulfónico en condiciones débilmente ácidas y luego se acopla con N-1-naftiletilendiamina para formar un tinte rojo púrpura, que se comparó con el producto estándar. 3. El agua utilizada en los experimentos con reactivos es agua destilada. Si no se especifica ningún reactivo, el reactivo puro se analiza de manera uniforme. 3.1 Tampón de cloruro de amonio: Agregue 500 ml de agua a un matraz volumétrico de 1 L, agregue con precisión 20,0 ml de ácido clorhídrico, agite bien, agregue con precisión 50 ml de hidróxido de amonio y diluya hasta la marca con agua. Si es necesario, use ácido clorhídrico diluido e hidróxido de amonio diluido para ajustar el valor del pH a 9,6 ~ 3,2 Solución de sulfato de zinc (0,42 mol/L): Pese 120 g de sulfato de zinc (ZnSO4·7H2O), disuélvalo en agua y diluya hasta. 1 000 mililitros. 3.3 Solución de hidróxido de sodio (20 g/L): Pesar 20 g de hidróxido de sodio, disolver en agua y diluir a 1 L. 3.4 Solución de ácido paraaminobencenosulfónico: Pesar 10 g de ácido paraaminobencenosulfónico, disolver en 700 ml de agua y 300 ml de ácido acético glacial, colocados en una botella marrón y almacenados a temperatura ambiente. Solución de 3,5n-1-naftiletilendiamina (1 g/l): Pesar 0,1 g de N-1-naftiletilendiamina, agregar ácido acético al 60 % para disolver y diluir a 100 ml, mezclar bien y colocar en una botella marrón. Guardar en el refrigerador. 3.6 Cromógeno: Mezcle la solución de N-1-naftiletilendiamina (1 g/L) y la solución de ácido p-aminobencenosulfónico en volúmenes iguales antes de usar. 3.7 Solución estándar de nitrito de sodio: Pesar con precisión 250,0 mg de nitrito de sodio secado en un desecador de gel de sílice durante 24 horas, disolver en agua, transferir a un matraz volumétrico de 500 ml, agregar 100 ml de tampón de cloruro de amonio y diluir hasta la marca con agua. mezclar bien y conservar en la oscuridad a 4°C. Esta solución equivale a 500 microgramos de nitrito de sodio por mililitro. 3.8 Solución estándar de nitrito de sodio: Antes de usar, tomar 1,00 ml de solución estándar de nitrito de sodio, colocarlo en un matraz volumétrico de 100 ml y agregar agua para diluir hasta la marca. Esta solución equivale a 5,0 microgramos de nitrito de sodio por mililitro. 4 instrumentos 4.1 trituradora pequeña. 4.2 Espectrofotómetro. 5 Método de operación 5.1 Procesamiento de la muestra Pese aproximadamente 10,00 g (5 g de grano), muela y mezcle la muestra uniformemente, colóquela en un pulverizador y agregue 70 ml.
Aprobado e implementado por la República Popular China* * y el Ministerio de Salud de la República Popular China el 1996-06-19.
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Agua y 12 ml de solución de hidróxido de sodio (20 g/L), mezclar bien, ajustar con solución de hidróxido de sodio (20 g/L) El pH de la muestra es de 8 a 8, transferirla cuantitativamente a un matraz aforado de 200 mL, agregar 10 mL de solución de sulfato de zinc y mezclar bien. Si no se produce un precipitado blanco, agregue de 2 a 5 ml de hidróxido de sodio y mezcle bien. Calentar al baño maría a 60°C durante 10 minutos, sacar, enfriar a temperatura ambiente, añadir agua hasta la marca y mezclar. Dejar reposar durante 0,5 h, filtrar con papel de filtro, desechar 20 ml del filtrado inicial y recoger el filtrado para su uso posterior. 5.2 5.2.1 Preparación de la curva estándar de nitrito para la determinación: pipeta 0, 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 4.0.5,0 ml de solución estándar de nitrito de sodio (equivalente a 0, 2,5, 5, 10, 65438+) Agregar 4,5 ml de amonio solución tampón de cloruro y 2,5 ml de ácido acético al 60 % al tubo de ensayo estándar. Agregue inmediatamente 5,0 ml de reactivo cromogénico. Agregue agua y use una cubeta de 1 cm (se puede reemplazar una cubeta de 2 cm cuando la sensibilidad sea baja) y deje reposar. en la oscuridad se deja durante 25 minutos, se ajusta el punto cero con un tubo cero, se mide la absorbancia a una longitud de onda de 550 nm y se dibuja una curva estándar.
Las muestras de bajo contenido se calculan preparando una curva estándar de bajo contenido. La serie estándar es: absorción 0, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 ml de solución estándar de nitrito de sodio (equivalente a 0, 2, 4, 6, 8, 10 microgramos de nitrito de sodio). 5.2.2 Medición de la muestra: Pipetear 10,0 ml del filtrado anterior (5.1) en un tubo colorimétrico con tapón de 25 ml y proceder según la ley que comienza en 5.2.1 "Agregar 4,5 ml de tampón de cloruro de amonio al tubo estándar". Haga un blanco de reactivo al mismo tiempo. 6 Calcular 10010012121×××= vv MMX........................(1) donde: x1. m 1——masa de la muestra, g; M2——la masa de nitrito en la solución de muestra para la determinación, microgramos (μg); v 1——el volumen total de la solución de tratamiento de la muestra, ml; Solución de muestra para determinación Volumen, mililitros (mL). Notas sobre los resultados: Informe la media aritmética con dos cifras significativas. 7 La diferencia relativa de la diferencia permitida es ≤10%. (2) Principio 8 de determinación de nitrato: después de precipitar la proteína y eliminar la grasa de la solución, pásela a través de una columna de cadmio o agregue cadmio en polvo para reducir los iones nitrato a iones nitrito. En condiciones débilmente ácidas, el nitrito se diazota con ácido p-aminobencenosulfónico y luego se acopla con naftiletilendiamina N-1 para formar un tinte rojo. Se mide la cantidad total de nitrito y el nitrito se resta del contenido total para obtener el resultado. contenido de nitrato. 9 Reactivos 9.1 Solución tampón de cloruro de amonio (pH 9,6 ~ 9,7): Igual que 3.1 9.2 Solución de sulfato de cadmio (0,1,4 mol/L): Pesar 37 g de sulfato de cadmio (CdSO4 · 8H2O) y disolverlo en agua y ajustar el volumen a 1 L 9.3 Solución de ácido clorhídrico (0,1 mol/L): Pipetear 8,4 ml de ácido clorhídrico y diluir a 1 L con agua.
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9.4 Solución estándar de nitrato de sodio: Pese con precisión 500,0 mg de nitrato de sodio de peso constante a 110 ~ 120 °C, agregue agua para disolver y transfiera a Capacidad de 500 ml En el frasco, agregue 50 ml de tampón de cloruro de amonio, diluya a volumen con agua, mezcle bien y guárdelo en un refrigerador a 4°C, protegido de la luz. Esta solución equivale a 1 mg de nitrato de sodio por ml. 9.5 Solución estándar de nitrato de sodio: Cuando esté en uso, tomar 1,0 ml de solución estándar de nitrato de sodio, colocarlo en un matraz volumétrico de 100 ml, agregar agua para diluir hasta la marca, mezclar bien y preparar cuando esté en uso. Esta solución equivale a 10 microgramos de nitrato de sodio por mililitro. 9.6 La solución estándar de nitrito de sodio es la misma que 3.8. 9.7 Columna de cadmio (cadmio en polvo). 9.7.1 Preparación de polvo de cadmio esponjoso: coloque una cantidad suficiente de varilla de zinc en 500 ml de solución de sulfato de cadmio durante 3 a 4 horas. Cuando todo el cadmio haya sido reemplazado por zinc, raspe suavemente con una varilla de vidrio y retírelo. la varilla de zinc restante para su uso. El cadmio se hunde hasta el fondo, se vierte el sobrenadante, se lava con agua varias veces usando el método de inclinación, luego se pasa a un molinillo, se agregan 500 ml de agua y se tritura durante aproximadamente 2 s. .2 Determinación de la eficacia reductora de la columna de cadmio: tomar un tubo medidor de ácido de 25 ml, presionar lana de vidrio de 1 cm de altura en el fondo de la columna a modo de relleno, colocar un pequeño embudo encima, añadir el Coloque polvo de cadmio recién preparado y agua en la columna y golpee suavemente la columna mientras agrega para eliminar el contenido de la columna, agregue polvo de cadmio hasta una altura de 8 ~ 10 cm y use 1 cm en la parte superior. Después de instalar la columna de cadmio, primero enjuáguela con 25 ml de ácido clorhídrico (0,1 mol/l) y luego enjuáguela dos veces con agua, 25 ml cada vez, y ajuste el caudal de la columna a 3 ~ 5 ml/min. Cuando la columna de cadmio no esté en uso, cúbrala con agua y mantenga la superficie horizontal sobre la capa de cadmio para que no queden burbujas en la capa de cadmio. Después de cada uso, la columna de cadmio debe enjuagarse con 25 ml de ácido clorhídrico (0,1 mol/l), enjuagarse dos veces con 25 ml de agua cada vez y finalmente cubrirse con agua. Primero agregue 25 ml de tampón de cloruro de amonio a la columna. Cuando el nivel del líquido esté cerca de la esponja de cadmio, absorba 2,0 ml de solución estándar de nitrato de sodio (10 μg/ml), reduzca a través de la columna y controle el caudal a 3. ~ 5 ml/min y utilizar el matraz aforado de 50 ml recibido. Agregue 5 ml de solución tampón de cloruro de amonio. Cuando el nivel del líquido esté cerca de la esponja de cadmio, agregue 15 ml de agua para lavar la columna. La solución reductora y la solución de lavado fluyen juntas hacia el matraz volumétrico. Añadir 5 ml de ácido acético al 60% y 10 ml de reactivo cromogénico, diluir a volumen con agua, mezclar bien y colocar en la oscuridad durante 25 min.
Utilice una cubeta de 1 cm, ajuste el punto cero con un tubo cero estándar, mida la absorbancia a una longitud de onda de 550 nm y calcule la eficiencia de reducción basándose en la curva estándar de nitrito (si la tasa de reducción de la columna de cadmio es inferior a 95 %, sumérjalo en ácido clorhídrico para su activación). 9.7.3 Determinación de la eficiencia de reducción del polvo de cadmio: antes de su uso, el polvo de cadmio debe remojarse en ácido clorhídrico para su activación, luego enjuagarse dos veces con agua y luego sumergirse en agua para su uso posterior. Utilice una cuchara angular para agregar el cadmio en polvo a un tubo de ensayo calibrado con tapón de 25 ml, graduado a 5 ml y sellado con un poco de agua; Pipetear 2,0 ml de solución estándar de nitrato de sodio y añadir 5 ml de tampón de cloruro de amonio. Tapar el tubo de ensayo, agitar bien durante 2 minutos, dejar reposar 5 minutos, filtrar con un embudo pequeño con una pequeña cantidad de algodón absorbente en el cuello del embudo, recoger cuantitativamente el filtrado en un matraz aforado de 50 mL, lavar el cadmio en polvo varias veces con 15 ml de agua, combinar los líquidos de lavado y filtrar. Después de agregar 5 ml de ácido acético (60%), agregar inmediatamente 10 ml de reactivo cromogénico, diluir a volumen con agua, mezclar bien y proteger de la luz durante 25 minutos. Utilice una cubeta de 1 cm, ajuste el punto cero con un tubo cero estándar, mida la absorbancia a una longitud de onda de 550 nm y calcule la eficiencia de reducción basándose en la curva estándar de nitrito. 9.7.4 Calcular 10020232.132××= MX………………………………………………………………(2) Entre ellos: x2 ———Eficiencia de reducción, %; — Masa de nitrato, microgramos (μ g); M3——Masa de nitrito medida después de la reducción de 20 μg de nitrato, μg;
Aprobado por la República Popular China* * y el Ministerio de Salud de la República Popular China Implementado el 19 de junio de 1996.
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1.232—Coeficiente de conversión de nitrito en nitrato. 10 Pasos del análisis 10.1 El tratamiento de la muestra es el mismo que 5.1. 10.2 Determinación (el método de la columna de cadmio o el método del polvo de cadmio reduce el nitrato a nitrito) Método 10.2.1A (método de la columna de cadmio): primero agregue 25 ml de cloro a la columna de cadmio activada. Tampón de amonio , cuando el nivel del líquido esté cerca del cadmio esponjoso, extraiga con precisión 10,0 ml del filtrado de muestra 5.1. Siga 9.7.2 y comience a operar de acuerdo con la ley desde "caudal de control 3 ~ 5 ml/min". 10.2.2 Método B (método de cadmio en polvo): Absorba con precisión 10,0 ml de filtrado de muestra 5.1 y colóquelo en un tubo de ensayo graduado y tapado de 25 ml. El tubo de ensayo se llena con polvo de cadmio con una altura de 5 ml. Ya que "Agregar 5 mL de tampón de cloruro de amonio..." proceder según 9.7.3. Nota: Las verduras y los encurtidos contienen un mayor contenido de nitrato. La solución de muestra se puede diluir a una concentración adecuada según el contenido real de nitrato en la muestra. 11 Calcular 1000)/(1000232.1)(344653×××××?= vvmmmx masa de muestra, g; M5——La masa de nitrito de sodio medida después de la reducción con polvo de cadmio, microgramos (μ g); M6——Directo La medida masa de nitrito, microgramos (μ g); 1,232 - el coeficiente para convertir el nitrito de sodio en nitrato de sodio. V3 - el volumen de la solución de tratamiento de la muestra, ml; Descripción del resultado: Informe la media aritmética con dos cifras significativas. Se permite que la diferencia relativa sea ≤10%, Parte 2 Polarografía oscilométrica (Determinación de nitrito) (Segundo método) Proteína precipitada. El ácido -aminobencenosulfónico se diazota en condiciones débilmente ácidas y luego se acopla con 8-hidroxiquinolina en condiciones débilmente alcalinas para generar un tinte amarillo anaranjado en el electrodo de mercurio. Se reduce para generar corriente. La corriente está relacionada linealmente con la concentración de nitrito y puede reducirse. comparar cuantitativamente con la curva estándar 14 Reactivo 14.1 Solución de ferrocianuro de potasio: Pesar 106,0 g de ferrocianuro de potasio [K4fe (CN) 6,3H2O], agregar agua para disolver y diluir a 1000 ml. acetato [Zn(Ch3C OO)2·2H2O], agregar 30 ml de ácido acético glacial, disolver en agua y diluir a 1000 ml de bórax saturado. Solución: pesar 5,0 g de borato de sodio (Na2B4O7 · 10H2O), disolver en 100 ml. de agua caliente, enfriar y reservar. 14.4 Solución de ácido paraaminobencenosulfónico (8 g/L): Pesar 2 g de ácido paraaminobencenosulfónico y calentarla, agregar 25 ml de ácido clorhídrico (1,0 mol/L). ), transferir a un matraz aforado de 250 mL y diluir.
Aprobado e implementado por el Ministerio de Salud de la República Popular China el 1996-06-19.
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14.5 Solución de 8-hidroxiquinolina (1 g/L): Pesar 0,250 g de 8-hidroxiquinolina, agregar 4 ml de ácido clorhídrico (0,1 mol/L). y una pequeña cantidad de agua para disolver y transferir a un matraz volumétrico de 250 ml para dilución. 14.6 Solución de EDTA (0,10 mol/L): Pesar 3,722 g de EDTA (c 10h 14 N2 o8 na·2H2O) y agregar 30 ml de agua para disolver, luego transferir a un matraz volumétrico de 100 ml y diluir con agua. 14.7 Amoníaco (5%): Pipetear 5,00 ml de amoníaco concentrado al 28% en un matraz volumétrico de 100 ml y agregar agua para diluir hasta la marca. 14.8 Solución estándar de nitrito de sodio: Pesar con precisión 0,100 g de nitrito de sodio en un desecador de gel de sílice durante 24 horas, agregar agua para disolver, transferir a un matraz volumétrico de 500 ml y diluir hasta la marca. Cada mililitro de esta solución equivale a 200 microgramos de nitrito de sodio. 14.9 Solución estándar de nitrito de sodio: Pese con precisión 5,00 ml de solución estándar de nitrito de sodio en un matraz volumétrico de 200 ml, agregue agua y diluya hasta la marca. Cada ml de esta solución equivale a 5 μg de nitrito de sodio. Luego agregue 10,00 ml de este diluyente en un matraz volumétrico de 100 ml y agregue agua para diluir hasta la marca. Cada mililitro de esta solución equivale a 0,5 microgramos de nitrito de sodio. 15 instrumentos 15,1 picadora de carne pequeña. 15.2 Polarografía oscilográfica JP-2A o JP-1A. 16 Métodos de operación 16.1 Procesamiento de la muestra Pese 5.000 g de muestra picada y mezclada (la fiambre y la salchicha de jamón se pueden llamar 10.00 ~ 20.00 g), colóquelos en un vaso de precipitados de 50 ml, agregue 12.5 ml de solución saturada de bórax y revuelva uniformemente. Calentar en agua hirviendo durante 15 minutos, luego retirar y enfriar a temperatura ambiente. Luego agregue 5 ml de solución de ferrocianuro de potasio mientras gira, agite bien y luego agregue 5 ml de solución de acetato de zinc para precipitar la proteína. Agregar agua hasta la marca, agitar bien y dejar reposar por 30 minutos. Retirar la capa superior de grasa, filtrar el líquido claro con papel de filtro, desechar 50 mL del filtrado inicial y reservar. 16.2 Medición: Tome 3 ml del filtrado anterior en un matraz volumétrico de 10 ml (o tubo colorimétrico) y tome 0, 0,50, 1,00, 65438, 2,00, 2,50 y 3,00 ml de solución estándar de nitrito de sodio respectivamente (equivalente a 0, 0,25). Agregue 0,20 ml de solución de EDTA (0,10 mol/L), deje reposar el 65438 durante 10 a 15 minutos y transfiera toda la solución de prueba a la celda electrolítica (vaso de precipitados pequeño de 10 ml). La polarografía oscilométrica utiliza un sistema de tres electrodos (el electrodo de gota de mercurio es el electrodo de trabajo, el electrodo de calomelanos saturado es el electrodo de referencia y el electrodo de platino es el electrodo auxiliar). Condiciones de referencia de determinación: el potencial de origen se ajusta a -0,2 v; el factor de amplificación es 0,1 (se puede seleccionar el factor de amplificación apropiado según el contenido de nitrito en la muestra. Si el contenido es alto, el factor de amplificación es alto, la amplificación el factor es superior a 0,1; de lo contrario, el factor de amplificación es 0,1 o menos); al comienzo del electrodo, jálelo a la posición de tres electrodos y el interruptor de medición se acerca al cátodo; Inserte los tres electrodos en la celda electrolítica y el instrumento escanea por sí solo cada 7 s. La altura de onda polarográfica de aproximadamente -0,56 V (fluctuación de potencial permitida de 10 ~ 20 MV) se registra en la pantalla fluorescente y se muestra una curva estándar. dibujado para comparar. 17 Calcular 10001000)/(100056784××××= vv MMX........................ ............ ........................(4)
La República Popular China* * y el Ministerio de Salud de la República Popular de China aprobado e implementado 1996-06-19
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En la fórmula: X4——se refiere al centro de la muestra Contenido de nitrito, g. /kg; M8 - la masa de nitrito en la solución de muestra para medición, μg; V5 - el volumen total de la solución de muestra, ml; V6 - el volumen de la solución de muestra para medición, ml; Descripción del resultado: Indique la media aritmética con dos cifras significativas. La diferencia relativa es ≤10%. Explicación adicional: Esta norma es propuesta por el Departamento de Supervisión Sanitaria del Instituto de Supervisión e Inspección de Higiene de los Alimentos de la provincia de Henan. El Instituto de Supervisión e Inspección, la Estación Provincial de Salud y Prevención de Epidemias de Jilin y la Facultad de Medicina de Qingdao fueron los responsables de la redacción.
La segunda ley fue redactada por la Universidad Normal Central de China, el Instituto Provincial de Inspección y Supervisión de Higiene de los Alimentos de Hubei y la Universidad Médica Tongji de Wuhan. El Ministerio de Salud encomienda al Instituto de Supervisión e Inspección de Higiene de los Alimentos del Ministerio de Salud la interpretación de esta norma. Aprobado e implementado por la República Popular China* * y el Ministerio de Salud de la República Popular China el 1996-06-19.